??高效液相色譜法(High Performance Liquid Chromatography,HPLC)是色譜法的一個重要分支,應用范圍十分廣泛,對樣品的適用性廣,不受分析對象揮發性和熱穩定性的限制,包括但不限于高分子化合物、離子型化合物、熱不穩定性化合物以及有生物活性的化合物,都能通過搭配不同檢測器的HPLC進行分離檢測。
歷史由來:
20世紀初,俄國植物化學家茨維特(Tswett)發現一個特別有趣的現象,他將碳酸鈣填充進豎立的玻璃管,上方加入植物色素,然用石油醚淋洗,經過一段時間洗脫之后,植物色素在碳酸鈣柱中實現分離,由一條色帶分散為數條平行的色帶,茨維特使用色譜法 chromatography (來自希臘字, chroma 意思是顏色, graphy 意思是記錄 - 直譯為顏色記錄)來描述他的彩色試驗。(令人好奇的是, 俄羅斯名字茨維特意思是顏色。)
圖1
20世紀60年代末,科克蘭、哈伯、荷瓦斯、莆黑斯、里普斯克等人開發了世界上第一臺液相色譜法色譜法色譜法色譜法,開啟了色譜時代。
工作原理:
高效液相色譜儀由溶劑輸送系統、進樣系統、分離系統、檢測系統、記錄及數據處理系統組成。
工作時儲液器中的流動相被高壓泵壓入檢測系統,樣品溶液經進樣器進入色譜系統,被流動相載入色譜柱(固定相)內,由于樣品溶液中的各組分在兩相中具有不同的分配系數,在兩相中作相對運動時,經過反復多次的吸附-解吸的分配過程,各組分在移動速度上產生較大的差別,被分離成單個組分依次從柱內流出,在其通過檢測器時,被轉換成信號傳送到記錄儀,數據以圖譜形式輸出。
圖2 高效液相色譜儀的系統組成
優勢特點:
高效液相色譜法有“三高一廣”的特點:
①高壓:高效液相色譜儀供液和進樣壓力大,壓力為150-350bar。
②高速:分析速度快、流動相流速快,較經典液體色譜法速度要快得多,通常分析一個樣品在 15~30 分鐘,有些樣品甚至在5分鐘內即可完成,一般小于 1 小時。
③高效:分離效能高??蛇x擇固定相和流動相以達到最佳分離效果,比工業精餾塔的分離效能高出許多倍。
④應用范圍廣:70%以上的有機化合物可用高效液相色譜分析,特別是高沸點、大分子、強極性、熱穩定性差的化合物分離分析,具有優勢。
高效液相色譜儀的應用:高效液相色譜具有“三高一廣”、檢測靈敏度好、尤其適用于沸點高且熱不穩定生理活性物質的分析,主要被應用于醫藥、精細化工及化妝品等行業等領域,應用范圍較廣。在醫藥研究分析中的應用:
①分離分析藥物的組分含量;
②藥物生產中進行中間控制;
③分析藥物在體內的殘量;
④測定藥物在各種器官中的代謝產物,特別是研究藥物的代謝產物在血清中存在的情況。
在化妝品行業的應用:化妝品對人體皮膚有害物質的含量會影響個人的皮膚健康。采用液相色譜法可以測定化妝品中某些有害物質的成分和含量。
①化妝品中禁用物質中的應用:抗生素、激素、氫醌等;
②化妝品中防腐劑中的應用:甲基異噻唑啉酮、苯氧乙醇、尼泊金酯,再如辛酰羥肟酸等防腐劑助劑,也能進行含量的分析;
③有特定功效的化妝品原料篩查;
④化妝品中防曬劑、著色劑中的應用。
隨著科技的進步,色譜應用越來越廣泛,必定能為化妝品行業提供強有力的支撐,促進化妝品良性快速地進步。
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